Lactose-(lac)-Operon : β-galactosidase-test with ONPG

Lactose-(lac)-Operon : β-galactosidase-test with ONPG

12.09.10 생명과학실험 - la.hwp

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설명 : 본 실험은 미생물과 같은 원핵생물의 유전 시스템인 operon의 구조와 Mechanism을 이해하고 이를 토대로 E. coli의 lac-operon 활성 정도를 Test하는 것을 목적으로 한다.

Ⅰ. Introduction Ⅱ. Materials i. 박테리아의 배양 E. coli MG 1655(wild type, K12 derivate), M9배지, 최소배지(10x M9 20ml, 1mM CaCl2 2ml, 1MgSO4 0.2ml, 10% AHC 2ml, 멸균수 175.8ml), D-Glucose(0.1Mm), Lactose (0.1M), shaker, pipets, spectrophotometer(600nm), ice, micropipet ii. β-Galactosidase test with ONPG Reaction buffer(pH7.0의 0.1M KPi buffer, 10mM KCl, 1mM MgCl2), 0.1% SDS from 10% stock solution, Chloroform, ONPG solution(4mg/ml in H2O), 1M Na2CO3, 2-Mercaptoethanol 2.7ml/l, H2O, spectrophotoeter(400nm), ice, 파스퇴르 피펫, micropipet, centrifuge Ⅲ. Methods i. 박테리아의 배양 ii. β-Galactosidase test with ONPG Ⅳ. Result Ⅴ. Discussions Ⅵ. Question (배양액의 β-Galactosidase activity 예측) Ⅶ. Reference

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